1 Frage zu Methodenerklärung

Ein Biofilmassay mit Kristallviolett ist eine gängige Methode zur Quantifizierung von Biofilmen, die von Mikroorganismen auf festen Oberflächen gebildet werden. Hier ist eine allgemeine Erklärung der Methode: 1. **Vorbereitung der Kulturen**: - Mikroorganismen werden in einem geeigneten Nährmedium kultiviert, bis sie die gewünschte Wachstumsphase erreichen. 2. **Inokulation**: - Eine definierte Menge der Kultur wird in die Vertiefungen einer 96-Well-Platte oder auf eine andere geeignete Oberfläche gegeben. 3. **Inkubation**: - Die Platte wird für eine bestimmte Zeit bei einer geeigneten Temperatur inkubiert, um die Bildung von Biofilmen zu ermöglichen. 4. **Waschen**: - Nach der Inkubation wird das Medium entfernt, und die Wells werden vorsichtig mit Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) gewaschen, um nicht anhaftende Zellen zu entfernen. 5. **Färbung**: - Kristallviolett-Lösung (meist 0,1% w/v) wird zu den Wells hinzugefügt und für eine bestimmte Zeit inkubiert, um die Biofilme zu färben. 6. **Entfernung der überschüssigen Farbe**: - Die Kristallviolett-Lösung wird entfernt, und die Wells werden mehrmals mit Wasser gewaschen, um überschüssige Farbe zu entfernen. 7. **Lösen des Farbstoffs**: - Der gebundene Farbstoff wird durch Zugabe eines Lösungsmittels wie Ethanol oder Aceton freigesetzt. 8. **Messung**: - Die optische Dichte (OD) der gelösten Farbe wird bei einer spezifischen Wellenlänge (meist 570 nm) mit einem Mikrotiterplatten-Reader gemessen. Die OD-Werte korrelieren mit der Menge des gebildeten Biofilms. Diese Methode ist einfach und kostengünstig und ermöglicht die vergleichende Analyse der Biofilmbildung unter verschiedenen Bedingungen oder durch verschiedene Mikroorganismen.