3 Fragen zu Nukleinsäuren

Die Methode A280 bezieht sich auf die Messung der Absorption von Licht bei 280 nm, um die Konzentration von Proteinen in einer Lösung zu bestimmen, da Aromaten wie Tryptophan und Tyrosin in Proteinen bei dieser Wellenlänge absorbieren. Nukleinsäuren, wie DNA und RNA, absorbieren ebenfalls Licht, jedoch bei einer anderen Wellenlänge (260 nm). Wenn Nukleinsäuren in einer Probe vorhanden sind, können sie die A280-Messung beeinflussen, indem sie die Gesamtabsorption erhöhen, was zu einer Überbewertung der Proteinmenge führen kann. Dies geschieht, weil die Absorption von Nukleinsäuren bei 260 nm nicht direkt in die A280-Messung einfließt, aber die Gesamtabsorption der Probe beeinflusst. Daher ist es wichtig, die Konzentration von Nukleinsäuren in der Probe zu berücksichtigen, um genaue Proteinmessungen zu erhalten. Um die Auswirkungen von Nukleinsäuren zu minimieren, kann man die A260/A280-Verhältnisse berechnen, um die Reinheit der Proteinprobe zu beurteilen. Ein Verhältnis von etwa 0,6 bis 0,8 deutet auf eine relativ reine Proteinprobe hin, während niedrigere Werte auf Verunreinigungen durch Nukleinsäuren hinweisen können.

Nach einer Gelelektrophorese können Nukleinsäuren durch verschiedene Methoden sichtbar gemacht werden. Die gängigsten Methoden sind: 1. **Ethidiumbromid (EtBr) Färbung**: Ethidiumbromid ist ein fluoreszierender Farbstoff, der sich in die DNA einlagert. Nach der Gelelektrophorese wird das Gel in eine Ethidiumbromid-Lösung getaucht oder der Farbstoff wird direkt in das Gel gegeben. Unter UV-Licht fluoresziert der Farbstoff, wodurch die DNA-Banden sichtbar werden. 2. **SYBR Green/SYBR Gold**: Diese Farbstoffe sind weniger toxisch als Ethidiumbromid und fluoreszieren ebenfalls unter UV-Licht. Sie werden ähnlich wie Ethidiumbromid verwendet. 3. **GelRed/GelGreen**: Diese Farbstoffe sind ebenfalls weniger toxisch und bieten eine hohe Sensitivität. Sie können direkt in das Gel gegeben oder nach der Elektrophorese aufgetragen werden. 4. **Silberfärbung**: Diese Methode ist sehr sensitiv und kann sehr kleine Mengen an Nukleinsäuren sichtbar machen. Das Gel wird in einer Reihe von Lösungen behandelt, die Silberionen enthalten, die sich an die Nukleinsäuren binden und nach einer Reduktionsreaktion sichtbar werden. 5. **Methylene Blue**: Ein weniger sensitiver, aber ungiftiger Farbstoff, der DNA-Banden sichtbar machen kann. Das Gel wird in eine Methylene Blue-Lösung getaucht und die Banden werden unter normalem Licht sichtbar. Jede dieser Methoden hat ihre Vor- und Nachteile in Bezug auf Sensitivität, Toxizität und Handhabung. Die Wahl der Methode hängt von den spezifischen Anforderungen des Experiments ab.

Ja, Hämatoxylin färbt Nukleinsäuren. Hämatoxylin ist ein basischer Farbstoff, der sich an saure Strukturen wie DNA und RNA bindet. In der Histologie wird Hämatoxylin häufig verwendet, um Zellkerne blau bis violett zu färben, da diese reich an Nukleinsäuren sind.