Wird zu einem LDH-Assay Pyruvat oder Lactat hinzugegeben?

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Wird zu einem LDH-Assay Pyruvat oder Lactat hinzugegeben?

Antwort

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Lungen-Enzymklasse?

Zu welcher Enzymklasse gehört Amylase?

Wie funktioniert der LDH-Assay?

Wie funktioniert der LDH-Assay und welche Kits kann man verwenden?

Wie funktioniert das LDH Cytotoxicity Detection Kit (Roche)?

Erläutere am Beispiel der Lactose den Ablauf einer enzymatischen Reaktion mit Fachbegriffen.

Wie wird Laktose gespalten?

Warum liefert ein Patch-Clamp Assay ein funktionales Signal? Vergleich zum Westernblot oder Bindungsassay.

Was ist Sättigung eines Enzyms?

Welche Alternativen zu Single-Use Pipettenspitzen und Reagenzien gibt es in klinischen Labors?

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Bei einem LDH (Lactatdehydrogenase) Assay wird in der Regel Lactat hinzugegeben. Der LDH Assay misst die Aktivität des Enzyms Lactatdehydrogenase, das die Umwandlung von Lactat zu Pyruvat katalysiert. Durch die Zugabe von Lactat kann die Enzymaktivität gemessen werden, indem die Menge des produzierten Pyruvats oder die Veränderung der NADH-Konzentration beobachtet wird.

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Die Lunge enthält verschiedene Enzymklassen, die unterschiedliche Funktionen erfüllen. Zu den wichtigsten Enklassen in der Lunge gehören: 1. **Proteasen**: Diese Enzyme bauen Proteine... [mehr]

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Die Lunge enthält verschiedene Enzymklassen, die unterschiedliche Funktionen erfüllen. Zu den wichtigsten Enklassen in der Lunge gehören: 1. **Proteasen**: Diese Enzyme bauen Proteine ab und spielen eine Rolle bei der Abwehr von Krankheitserregern und der Gewebereparatur. Ein bekanntes Beispiel ist die Elastase. 2. **Antioxidative Enzyme**: Diese Enzyme schützen die Lunge vor oxidativem Stress. Beispiele sind Superoxiddismutase (SOD) und Katalase. 3. **Cytochrom-P450-Enzyme**: Diese Enzyme sind an der Metabolisierung von Schadstoffen und Medikamenten beteiligt. 4. **Phospholipasen**: Diese Enzyme sind an der Zersetzung von Phospholipiden beteiligt und spielen eine Rolle bei der Regulation von Entzündungen. 5. **Hydrolasen**: Diese Enzyme katalysieren die Hydrolyse von chemischen Bindungen. Ein Beispiel ist die Acetylcholinesterase, die den Neurotransmitter Acetylcholin abbaut. Diese Enzymklassen tragen zur Aufrechterhaltung der Lungenfunktion und zum Schutz vor schädlichen Einflüssen bei.

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Amylase gehört zur Enzymklasse der Hydrolasen. Diese Enzyme katalysieren die Hydrolyse von Bindungen, das heißt, sie spalten Moleküle durch die Addition von Wasser. Amylase speziell is... [mehr]

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Amylase gehört zur Enzymklasse der Hydrolasen. Diese Enzyme katalysieren die Hydrolyse von Bindungen, das heißt, sie spalten Moleküle durch die Addition von Wasser. Amylase speziell ist für den Abbau von Stärke und Glykogen zu Zuckern wie Maltose und Glukose verantwortlich.

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Der LDH-Assay (Lactatdehydrogenase-Assay) ist einochemischer Test, der die Aktivität des Enzyms Lactatdehydrogenase (LDH) misst. LDH ist ein Enzym, das in fast allen Körperzellen vorkommt un... [mehr]

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Der LDH-Assay (Lactatdehydrogenase-Assay) ist einochemischer Test, der die Aktivität des Enzyms Lactatdehydrogenase (LDH) misst. LDH ist ein Enzym, das in fast allen Körperzellen vorkommt und eine wichtige Rolle im Stoffwechsel spielt, insbesondere im anaeroben Abbau von Glukose zu Laktat. Hier ist eine allgemeine Übersicht, wie der LDH-Assay funktioniert: 1. **Probenvorbereitung**: Zellen oder Gewebeproben werden gesammelt und lysiert, um den Zellinhalt freizusetzen. Alternativ kann der Assay auch direkt im Zellkulturmedium durchgeführt werden, um die LDH-Freisetzung als Indikator für Zellschädigung oder -lyse zu messen. 2. **Reaktionsmischung**: Die Probe wird mit einer Reaktionsmischung kombiniert, die typischerweise NAD+ (Nicotinamidadenindinukleotid) und Laktat enthält. LDH katalysiert die Umwandlung von Laktat zu Pyruvat unter Reduktion von NAD+ zu NADH. 3. **Messung der NADH-Produktion**: Die Menge an NADH, die während der Reaktion produziert wird, ist proportional zur LDH-Aktivität in der Probe. NADH hat eine charakteristische Absorptionswellenlänge (340 nm), die mit einem Spektralphotometer gemessen werden kann. 4. **Datenanalyse**: Die Absorptionsänderung bei 340 nm wird über die Zeit gemessen, und die Rate der NADH-Produktion wird berechnet. Diese Rate ist ein Maß für die LDH-Aktivität in der Probe. Der LDH-Assay wird häufig verwendet, um Zellschädigung oder -lyse zu bewerten, da LDH bei Zellschädigung aus den Zellen freigesetzt wird. Er kann auch zur Untersuchung von Stoffwechselprozessen und zur Enzymaktivitätsmessung in verschiedenen biologischen Proben eingesetzt werden.

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Der LDH-Assay (Lactatdehydrogenase-Assay) ist eine biochemische Methode zur Messung der Aktivität des Enzyms Lactatdehydrogenase (LDH) in einer Probe. LDH ist ein Enzym, das in fast allen Kö... [mehr]

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Der LDH-Assay (Lactatdehydrogenase-Assay) ist eine biochemische Methode zur Messung der Aktivität des Enzyms Lactatdehydrogenase (LDH) in einer Probe. LDH ist ein Enzym, das in fast allen Körperzellen vorkommt und eine wichtige Rolle im Stoffwechsel spielt, insbesondere im anaeroben Abbau von Glukose zu Laktat. ### Funktionsweise des LDH-Assays: 1. **Probenvorbereitung**: Zellen oder Gewebeproben werden lysiert, um den Zellinhalt freizusetzen, einschließlich LDH. 2. **Reaktionsmischung**: Die Probe wird mit einer Reaktionsmischung inkubiert, die typischerweise NAD+ (Nicotinamidadenindinukleotid) und Laktat enthält. 3. **Enzymatische Reaktion**: LDH katalysiert die Umwandlung von Laktat zu Pyruvat, wobei NAD+ zu NADH reduziert wird. 4. **Messung**: Die Menge an NADH, die gebildet wird, kann spektrophotometrisch bei 340 nm gemessen werden, da NADH Licht bei dieser Wellenlänge absorbiert. Die Rate der NADH-Bildung ist proportional zur LDH-Aktivität in der Probe. ### Verfügbare Kits und deren Funktionsweise: Es gibt verschiedene kommerzielle Kits für den LDH-Assay, die alle auf dem oben beschriebenen Prinzip basieren. Hier sind einige Beispiele: 1. **CytoTox 96® Non-Radioactive Cytotoxicity Assay (Promega)**: - Misst die LDH-Freisetzung aus beschädigten Zellen. - Die Reaktion wird durch die Reduktion von NAD+ zu NADH und die anschließende Umwandlung eines Tetrazoliumsalzes in ein farbiges formazan Produkt gemessen. - [Promega CytoTox 96®](https://www.promega.com/products/cell-health-assays/cytotoxicity-assays/cytotox-96-non-radioactive-cytotoxicity-assay/) 2. **LDH Cytotoxicity Detection Kit (Roche)**: - Misst ebenfalls die LDH-Freisetzung aus beschädigten Zellen. - Verwendet eine ähnliche Methode wie der CytoTox 96® Assay, bei der die Reduktion von NAD+ zu NADH und die Umwandlung eines Tetrazoliumsalzes in ein farbiges Produkt gemessen wird. - [Roche LDH Cytotoxicity Detection Kit](https://lifescience.roche.com/shop/products/ldh-cytotoxicity-detection-kit) 3. **TOX7 In Vitro Toxicology Assay Kit, Lactate Dehydrogenase based (Sigma-Aldrich)**: - Misst die LDH-Freisetzung aus beschädigten Zellen. - Verwendet eine kolorimetrische Methode, bei der die Umwandlung von NAD+ zu NADH und die anschließende Reduktion eines Tetrazoliumsalzes zu einem farbigen Produkt gemessen wird. - [Sigma-Aldrich TOX7 Kit](https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/tox7) Diese Kits enthalten in der Regel alle notwendigen Reagenzien und detaillierte Protokolle, um den Assay durchzuführen. Die Wahl des Kits hängt von den spezifischen Anforderungen deines Experiments ab, wie z.B. der Sensitivität, der Art der Proben und den verfügbaren Geräten.

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Das LDH Cytotoxicity Detection Kit von Roche wird verwendet, um die Zytotizität von Zellen zu messen, indem die Freisetzung von Laktatdehydrogenase (LDH) aus beschädigten oder lysierten Zell... [mehr]

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Das LDH Cytotoxicity Detection Kit von Roche wird verwendet, um die Zytotizität von Zellen zu messen, indem die Freisetzung von Laktatdehydrogenase (LDH) aus beschädigten oder lysierten Zellen quantifiziert wird. Hier ist eine allgemeine Beschreibung, wie das Kit funktioniert: 1. **Zellkultur und Behandlung**: Zellen werden in einer Mikrotiterplatte kultiviert und mit der zu testenden Substanz behandelt. Diese Substanz kann potenziell zytotoxisch sein und Zellschäden verursachen. 2. **Freisetzung von LDH**: Wenn Zellen beschädigt oder lysiert werden, wird LDH, ein Enzym, das normalerweise im Zytoplasma vorhanden ist, in das Kulturmedium freigesetzt. 3. **Reagenzienzugabe**: Nach der Inkubationszeit wird eine Reagenzienmischung, die im Kit enthalten ist, zu den Proben gegeben. Diese Mischung enthält ein Tetrazoliumsalz (INT) und ein Diaphorase-Enzym. 4. **Enzymatische Reaktion**: LDH katalysiert die Umwandlung von Laktat zu Pyruvat, wobei NADH entsteht. Das Diaphorase-Enzym nutzt das NADH, um das Tetrazoliumsalz (INT) zu reduzieren, was zu einem farbigen Formazan-Produkt führt. 5. **Messung**: Die Intensität der Farbreaktion, die proportional zur Menge an freigesetztem LDH ist, wird spektrophotometrisch bei einer bestimmten Wellenlänge (meistens 490 nm) gemessen. 6. **Datenanalyse**: Die Absorptionswerte werden verwendet, um die Zytotoxizität zu berechnen. Höhere Absorptionswerte deuten auf eine höhere LDH-Freisetzung und somit auf eine höhere Zytotoxizität hin. Weitere Informationen findest du auf der offiziellen Website von Roche: [Roche LDH Cytotoxicity Detection Kit](https://www.sigmaaldrich.com/DE/de/product/roche/11644793001).

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Gerne! Hier ist eine Erläuterung Ablaufs einer enzymatischen Reaktion am Beispiel der Lactose: 1. **Substrat**: Lactose ist ein Disaccharid, das aus den beiden Monosacchariden Glucose und Galact... [mehr]

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Gerne! Hier ist eine Erläuterung Ablaufs einer enzymatischen Reaktion am Beispiel der Lactose: 1. **Substrat**: Lactose ist ein Disaccharid, das aus den beiden Monosacchariden Glucose und Galactose besteht. In diesem Fall ist Lactose das Substrat der enzymatischen Reaktion. 2. **Enzym**: Das Enzym, das Lactose spaltet, heißt Lactase. Enzyme sind Proteine, die biochemische Reaktionen katalysieren, indem sie die Aktivierungsenergie der Reaktion senken. 3. **Aktives Zentrum**: Das aktive Zentrum ist der spezifische Bereich des Enzyms, an dem das Substrat bindet. Die Struktur des aktiven Zentrums ist so geformt, dass es genau zum Substrat passt, ähnlich wie ein Schlüssel in ein Schloss (Schlüssel-Schloss-Prinzip). 4. **Enzym-Substrat-Komplex**: Wenn Lactose an das aktive Zentrum der Lactase bindet, bildet sich der Enzym-Substrat-Komplex. Diese Bindung ist oft durch nicht-kovalente Wechselwirkungen wie Wasserstoffbrücken, Ionenbindungen und Van-der-Waals-Kräfte stabilisiert. 5. **Katalyse**: Im Enzym-Substrat-Komplex wird die Lactose durch hydrolytische Spaltung in ihre beiden Monosaccharide, Glucose und Galactose, zerlegt. Dies geschieht durch die Zugabe eines Wassermoleküls (Hydrolyse). 6. **Produkte**: Die Produkte der Reaktion sind Glucose und Galactose. Diese werden freigesetzt, nachdem die Reaktion abgeschlossen ist. 7. **Enzym-Recycling**: Nach der Freisetzung der Produkte bleibt das Enzym unverändert und kann erneut eine Reaktion katalysieren. Es kehrt in seinen ursprünglichen Zustand zurück und ist bereit, ein weiteres Substratmolekül zu binden. Zusammengefasst läuft die enzymatische Reaktion der Lactose-Hydrolyse wie folgt ab: Lactose (Substrat) + Lactase (Enzym) → Enzym-Substrat-Komplex → Glucose + Galactose (Produkte) + Lactase (unverändertes Enzym). Dieser Prozess zeigt, wie Enzyme spezifisch und effizient biochemische Reaktionen katalysieren.

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Die Spaltung der Laktose, auch als Laktosehydrolyse bekannt, ist ein biochemischer Prozess, bei dem das Disaccharid Laktose in seine beiden Monosaccharide, Glukose und Galaktose, zerlegt wird. Dies ge... [mehr]

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Die Spaltung der Laktose, auch als Laktosehydrolyse bekannt, ist ein biochemischer Prozess, bei dem das Disaccharid Laktose in seine beiden Monosaccharide, Glukose und Galaktose, zerlegt wird. Dies geschieht durch das Enzym Laktase, das im Dünndarm produziert wird. Hier ist der grundlegende Ablauf der Laktosehydrolyse: 1. **Laktoseaufnahme**: Laktose wird durch den Verzehr von Milch und Milchprodukten aufgenommen. 2. **Enzymatische Spaltung**: Im Dünndarm trifft die Laktose auf das Enzym Laktase. 3. **Hydrolyse**: Laktase katalysiert die Hydrolyse der Laktose, wobei ein Wassermolekül verwendet wird, um die Bindung zwischen Glukose und Galaktose zu brechen. 4. **Freisetzung der Monosaccharide**: Die resultierenden Monosaccharide, Glukose und Galaktose, werden freigesetzt und können dann durch die Darmwand ins Blut aufgenommen werden. Menschen mit Laktoseintoleranz haben eine verminderte Produktion von Laktase, was dazu führt, dass Laktose im Darm unverdaut bleibt und Symptome wie Blähungen, Bauchschmerzen und Durchfall verursachen kann.

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Ein Patch-Clamp Assay liefert ein „funktionales Signal“, weil er die Aktivität von Ionenkanälen in Zellmembranen direkt misst. Diese Methode ermöglicht es, die Ströme,... [mehr]

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Ein Patch-Clamp Assay liefert ein „funktionales Signal“, weil er die Aktivität von Ionenkanälen in Zellmembranen direkt misst. Diese Methode ermöglicht es, die Ströme, die durch einzelne oder mehrere Ionenkanäle fließen, in Echtzeit zu beobachten und zu quantifizieren. Dadurch erhält man Informationen über die Funktionalität der Kanäle, wie z.B. ihre Leitfähigkeit, Öffnungs- und Schließmechanismen sowie ihre Reaktion auf verschiedene Stimuli oder pharmakologische Substanzen. Im Vergleich dazu liefern Westernblot und Bindungsassays keine direkten funktionalen Informationen: 1. **Westernblot**: Diese Technik dient zum Nachweis und zur Quantifizierung spezifischer Proteine in einer Probe. Sie gibt Auskunft über die Anwesenheit und Menge eines Proteins, aber nicht über dessen funktionelle Aktivität. Ein Westernblot kann zeigen, ob ein Protein exprimiert wird und ob es möglicherweise modifiziert ist (z.B. phosphoryliert), aber nicht, ob es funktional aktiv ist. 2. **Bindungsassay**: Diese Methode misst die Bindung eines Liganden (z.B. eines Arzneimittels) an ein Zielmolekül (z.B. einen Rezeptor). Ein Bindungsassay kann Informationen über die Affinität und Spezifität der Bindung liefern, aber nicht darüber, ob diese Bindung eine funktionelle Reaktion auslöst. Es zeigt also, dass eine Interaktion stattfindet, aber nicht, welche funktionellen Konsequenzen diese Interaktion hat. Zusammengefasst: Ein Patch-Clamp Assay misst direkt die funktionale Aktivität von Ionenkanälen, während Westernblot und Bindungsassays eher strukturelle oder bindungsspezifische Informationen liefern, ohne direkte Aussagen über die Funktionalität zu machen.

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Die Sättigung eines Enzyms bezieht sich auf den Zustand, in dem alle aktiven Zentren des Enzyms von Substratmolekülen besetzt sind. In diesem Zustand erreicht die Reaktionsgeschwindigkeit ih... [mehr]

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Die Sättigung eines Enzyms bezieht sich auf den Zustand, in dem alle aktiven Zentren des Enzyms von Substratmolekülen besetzt sind. In diesem Zustand erreicht die Reaktionsgeschwindigkeit ihr Maximum und kann durch eine weitere Erhöhung der Substratkonzentration nicht weiter gesteigert werden. Dies wird oft durch die Michaelis-Menten-Kinetik beschrieben, bei der die maximale Reaktionsgeschwindigkeit (Vmax) erreicht wird, wenn das Enzym vollständig gesättigt ist.

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In automatisierbaren Analysesystemen im klinischen Labor, die keine Single-Use-Pipettenspitzen und Reagenzien verwenden, kommen häufig wiederverwendbare Pipettensysteme und Bulk-Reagenzien zum Ei... [mehr]

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In automatisierbaren Analysesystemen im klinischen Labor, die keine Single-Use-Pipettenspitzen und Reagenzien verwenden, kommen häufig wiederverwendbare Pipettensysteme und Bulk-Reagenzien zum Einsatz. Diese Systeme sind so konzipiert, dass sie eine hohe Präzision und Genauigkeit bei der Probenverarbeitung gewährleisten, während sie gleichzeitig die Kosten und den Abfall reduzieren. Wiederverwendbare Pipettensysteme werden nach jedem Gebrauch gründlich gereinigt und sterilisiert, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden. Dies kann durch automatische Reinigungszyklen innerhalb des Analysesystems oder durch manuelle Reinigung erfolgen. Bulk-Reagenzien werden in größeren Mengen bereitgestellt und in speziellen Behältern gelagert, die mit dem Analysesystem verbunden sind. Diese Reagenzien werden dann in den erforderlichen Mengen für jede Analyse entnommen, was die Effizienz erhöht und die Notwendigkeit für häufige Nachfüllungen reduziert. Zusätzlich können solche Systeme auch integrierte Spül- und Reinigungsmechanismen haben, um sicherzustellen, dass alle Komponenten sauber und einsatzbereit bleiben.