Wie wird ein Biofilmassay mit Kristallviolet durchgeführt?

Ein Biofilmassay mit Kristallviolett ist eine gängige Methode zur Quantifizierung von Biofilmen, die von Mikroorganismen auf festen Oberflächen gebildet werden. Hier ist eine allgemeine Erklärung der Methode:

1. **Vorbereitung der Kulturen**:
- Mikroorganismen werden in einem geeigneten Nährmedium kultiviert, bis sie die gewünschte Wachstumsphase erreichen.

2. **Inokulation**:
- Eine definierte Menge der Kultur wird in die Vertiefungen einer 96-Well-Platte oder auf eine andere geeignete Oberfläche gegeben.

3. **Inkubation**:
- Die Platte wird für eine bestimmte Zeit bei einer geeigneten Temperatur inkubiert, um die Bildung von Biofilmen zu ermöglichen.

4. **Waschen**:
- Nach der Inkubation wird das Medium entfernt, und die Wells werden vorsichtig mit Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) gewaschen, um nicht anhaftende Zellen zu entfernen.

5. **Färbung**:
- Kristallviolett-Lösung (meist 0,1% w/v) wird zu den Wells hinzugefügt und für eine bestimmte Zeit inkubiert, um die Biofilme zu färben.

6. **Entfernung der überschüssigen Farbe**:
- Die Kristallviolett-Lösung wird entfernt, und die Wells werden mehrmals mit Wasser gewaschen, um überschüssige Farbe zu entfernen.

7. **Lösen des Farbstoffs**:
- Der gebundene Farbstoff wird durch Zugabe eines Lösungsmittels wie Ethanol oder Aceton freigesetzt.

8. **Messung**:
- Die optische Dichte (OD) der gelösten Farbe wird bei einer spezifischen Wellenlänge (meist 570 nm) mit einem Mikrotiterplatten-Reader gemessen. Die OD-Werte korrelieren mit der Menge des gebildeten Biofilms.

Diese Methode ist einfach und kostengünstig und ermöglicht die vergleichende Analyse der Biofilmbildung unter verschiedenen Bedingungen oder durch verschiedene Mikroorganismen.